Uso da técnica de Southern Blot/Hibridização associada à reação em cadeia da polimerase para aumentar a sensibilidade no diagnóstico das infecções por hemoplasmas em gatos domésticos

Macieira, Daniel. BMenezes, Rita de Cássia A. A. deDamico, Cristiane BAlmosny, Nádia R. PMessick, Joanne B

O objetivo deste trabalho foi veriicar se a técnica de Southern Blot/Hibridização (SB) em associação à reação de polimerização em cadeia (PCR) aumenta a sensibilidade na detecção de DNA de hemoplasmas em gatos domésticos (Felis catus). O sangue total foi coletado em tubos contendo o anticoagulante ácido etilenodiamino tetra-acético, o DNA extraído a partir de 149 animais e a PCR realizada com o uso de sequências iniciadoras espécie-especíicas, para ampliicar subunidade 16S do RNA ribossomal de Mycoplasma haemofelis e ‘Candidatus M. haemominutum’ dessas amostras. Para a hibridização, foram utilizadas sondas especíicas quimicamente marcadas, e os resultados visualizados por meio da adição de substrato quimiluminescente seguida de autoradiograia. Dezoito (12,1%) das 149 amostras testadas apresentaram resultado PCR-positivo para o DNA de hemoplasmas. A técnica de SB mostrou que 24/149 (16,1%) amostras apresentaram resultado positivo para hemoplasmas, conirmando os 18 resultados PCR-positivos, além de revelar seis outros adicionais (p < 0,001). O método de SB com sondas especíicas mostrou-se mais sensível do que a PCR realizada isoladamente, sendo complementar para o diagnóstico das infecções causadas pelos hemoplasmas felinos.(AU)