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Periódicos Brasileiros em Medicina Veterinária e Zootecnia

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  4. Vol. 18 (2008) - Fascículo 1
p. 25-31

Avaliação in vitro da atividade citotóxica de drogas antivirais em fibroblastos caprinos

Araújo, Suzana Aparecida Costa deTeixeira, Maria Fátima da SilvaDantas, Tânia Valeska MedeirosMiranda, Aline MesquitaLima, Francisco Esmaile SalesMelo, Valeska Shelda Pessoa deRicarte, Aracely Rafaele FernandesCosta, Edmara Chaves

O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito citotóxico das drogas antivirais em cultivos de fibroblastos que foram isolados por explantation da membrana sinovial de caprinos soronegativos para a presença de anticorpos para lentivírus de pequenos ruminantes. As células eram mantidas em cultivo, para posterior utilização nos testes de citotoxicidade, contendo Meio Essencial Mínimo (MEM) acrescido de SFB 10%, antifúngico, antibióticos e glutamina. Para o teste de citotoxicidade das drogas, alíquotas de 0,1mL de fibroblastos, na concentração de 2 x105 células/mL, foram depositadas em microplacas de 96 poços, incubadas por 24 e 48h com posterior troca do meio por outro contendo diluições de 0,005 μM, 0,05 μM, 0,5 μM, 5μM, 50 μM e 500 μM de cada droga, que foram: zidovudina (AZT), estavudina, lamivudina, didanosina, efavirenz, atazanavir e lopinavir. Após 24 h de incubação o meio foi desprezado e acrescentou-se 100 μL de azul de tetrazólio (MTT) a uma concentração de 5 mg/mL. As microplacas foram incubadas por 4 h/37oC. Posteriormente, adicionou-se 100 μL de uma solução de 95% de isopropanol e 5% de ácido fórmico. A análise espectrofotométrica foi medida em um leitor de ELISA a uma absorbância de 600 nm. A partir dos valores das densidades ópticas determinou-se a concentração da droga capaz de reduzir em 50% as células viáveis. Dessa forma, a zidovudina e a didanosina na concentração de 0,05 μM e a estavudina e a lamivudina nas concentrações de 0,5 μM e 500 μM, respectivamente, não apresentaram efeitos tóxicos. Concluindo-se que essas drogas mostram potencial para o desenvolvimento de testes capazes de mensurar sua atividade antiviral frente aos lentivírus de pequenos ruminantes (SRLV – small ruminant lentivirus).

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