AVALIAÇÃO DE INICIADORES E PROTOCOLO PARA O DIAGNÓSTICO DA PANCITOPENIA TROPICAL CANINA POR PCR

Marra Alves, LucianoF. C. Linhares, GuidoSérgio T. Chaves, NiloC. Monteiro, LetíciaC. L. Linhares, Daniel

Este trabalho foi desenvolvido com o objetivo de padronizar um protocolo para a reação em cadeia da polimerase (PCR) e selecionar oligonucleotídeos iniciadores para a detecção específica de Ehrlichia canis, em uma única etapa de reação. Inicialmente foram obtidas seqüências depositadas no Genbank, referentes ao gene que codifica o 16S rRNA das espécies E. canis (número de acesso = AF162860), E. ewingii (U96436), E. platys (AF1567844), E. chaffeensis, (U86665), E. phagocytophila genogrupo (U02521), E. bovis (AF294789) e E. risticii (M21290), as quais foram submetidas ao alinhamento genético para a construção dos iniciadores. Do alinhamento foi selecionado, a partir de uma região semiconservada, um iniciador específico para E. canis, designado EBR1 (5-cctctggctataggaaattg- 3) e, de uma região conservada, um iniciador genérico EBR5 (5-ggagtgcttaacgcgttag- 3). Paralelamente foram obtidas amostras de sangue de dez cães que apresentavam infecção aguda por E. canis, confirmado pela presença de mórulas intracitoplasmáticas, características da riquétsia, em células mononucleares sangüíneas. O DNA genômico extraído dessas amostras foi utilizado para a avaliação da reação de PCR, empregando-se um protocolo adaptado de outros autores e o par de oligos EBR1/EBR5, selecionado neste trabalho. A reação de PCR apresentou resultados positivos para os 10 isolados de E. canis, amplificando o f