Isolamento e caracterização imunológica de roptrias de Neospora caninum
Martins, Thais AgostinhoBarros, Luiz Daniel deSouza Lima Nino, Beatriz deBernardes, Juliana CorreaSilva, Ana Clécia dos SantosMinutti, Ana FláviaCardim, Sergio TosiRose, Milena PatzerMartinez, ValentinaGarcia, João Luis
Neospora caninum é um parasita que causa perdas consideráveis na pecuária bovina. Compreender os seus mecanismos de infecção é essencial para compreender o seu impacto nos rebanhos. O fracionamento celular e a caracterização das frações poderão contribuir para a seleção de proteínas e organelas com características imunogênicas. Assim, o presente estudo teve como objetivo isolar frações roptrias e subcelulares de N. caninum utilizando gradiente de sacarose e caracterizar sua imunogenicidade em camundongos. Taquizoítos da cepa Nc-1 foram cultivados em células VERO, fracionados por esferas de vidro e ultracentrifugados em gradiente de sacarose variando de 0,25 a 1,8 M. As frações foram caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão. Cada fração foi inoculada com adjuvante Quil-A (20 µg) em camundongos para produzir anticorpos policlonais para cultura de células de imunofluorescência e western blotting. A ultracentrifugação resultou em três frações distintas (F1, F2 e F3) e um pellet. A fração um (F1) na concentração de 1,0 M continha membranas do parasita, F2 a 1,4 M continha roptria e conoide, F3 a 1,6 M continha mitocôndrias e o sedimento na fração de 1,8 M continha restos celulares. As quatro frações exibiram as mesmas bandas com pesos moleculares de 50, 51, 52 e 62 kDa. Apenas F2 apresentou estruturas de roptria e uma proteína de 54 kDa semelhante a NcROP2. Este estudo separou com sucesso frações subcelulares de N. caninum através de processamento e ultracentrifugação, identificou estruturas de roptria e determinou pesos específicos de proteínas de cada fração.(AU)
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