Use of PCR for detection of bovine tuberculosis bacillus in milk of positive skin test cows
Carvalho, Ricardo César TavaresCastro, Vinicius SilvaFernandes, Dandara Virginia Guia SemedoMoura, GreikaSoares, Elis SantosFigueiredo, Eduardo Eustáquio de SouzaPaschoalin, Vânia Margaret Flosi
O agente causador da tuberculose bovina (BTB) é o Mycobacterium bovis, uma bactéria pertencente ao complexo M. tuberculosis (CMT). O diagnóstico definitivo é realizado através do isolamento e identificação de M. bovis em amostras clínicas, utilizando uma combinação de cultura bacteriológica e métodos bioquímicos, que são considerados como padrão de ouro. Entretanto, esses procedimentos são trabalhosos e demorados. No presente estudo, foi avaliado um ensaio de PCR para a detecção direta de DNA de CMT em leite de vacas positivas ao teste cutâneo, utilizando primerspreviamente testados e comprovadamente confiáveis, para amplificação da região de interesse IS6110. Leite previamen- te contaminado com M. bovis foi utilizado como material de partida para a padronização da técnica. O procedimento envolveu a extração do DNA por lise enzimática (proteinase K e lisozima), fenol, clorofórmio, álcool isoamílico, segui- do de precipitação com etanol e PCR. O ensaio de PCR detectou BTB em leite artificialmente contaminado, com um limite de detecção de 100 UFC/mL, e também foi capaz de detectar o bacilo em 50% (75/150) das amostras de leite testadas. A técnica de PCR pode ser utilizada para auxiliar o diagnóstico in vivo da BTB, além de complementar os tes- tes sorológicos ou microbiológicos, tornando-se uma alternativa para estudos epidemiológicos da transmissão de BTB, prevenindo que o leite contaminado entre na cadeia de alimentos.(AU)
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