Production and use of mutanase from Trichoderma harzianum for effective degradation of streptococcal mutans

Wiater, AdrianSzczodrak, JanuszPleszczynska, MalgorzataPróchniak, Katarzyna

Os parâmetros básicos que afetam a producão da mutanase por Trichoderma harzianum F-340 em frascos agitados e em fermentadores foram estabelecidos. O melhor meio para producão da enzima foi o meio Mandels com pH inicial de 5,3, suplementado com 0,3 per center de mutana e 0,05 per center de peptona e inoculado com 20 per center de um micélio de 72h. Demonstrou-se que a massa micelial, usada como única fonte de carbono no meio de cultura, induziu a síntese de mutanase, podendo ser empregada como um substituto barato e de fácil obtencão de mutana bacteriana. Empregando-se condicões otimizadas de cultura, foi possível obter um alto rendimento de producão de mutanase (0,6-0,7 U/mL, 2,0-2,5 U/mg de proteína) em pouco tempo (3-5 dias), ultrapassando os melhores resultados relatados na literatura. A enzima bruta foi estável em pH de 4,5 até 6,0 e em temperatura até 40ºC. A atividade máxima foi obtida a 45ºC e pH 5,5. A mutanase obtida deste fungo foi bastante estável durante a seu armazenamento e apresentou um levado potencial hidrolítico sobre as ligacões mistas (a-1,3, a-1,6) da mutana estreptocócica insolúvel em água (a taxa de hidrólise em 24 horas foi 69 per center). Os produtos resultantes da reacão enzimática durante a hidrólise indicaram que a mutanase possuía uma acão tipo exo sobre a mutana. A análise cromatográfica em camada delgada mostrou que o principal produto resultante da acão da mutanase sobre a mutana era glicose. O potencial de aplicacão de mutanase na estomatologia é discutido.