Asparaginase II-GFP fusion as a tool for studying the secretion of the enzyme under nitrogen starvation

Sotero-Martins, AdrianaBon, Elba Pinto da SilvaCarvajal, Elvira

A produção de asparaginase II de Saccharomyces cerevisiae é regulada por nitrogênio e pode ser utilizada como um sistema modelo para estudar outras proteínas secretadas, em leveduras. A proteína "green fluorescent protein" (GFP) de Aequorea victoria foi fusionada à porção carboxi-terminal de Asp3p por integração genômica da sequência de GFP ao locus ASP3. Determinaram-se os níveis de atividade de asparaginase II, mRNA ASP3, mRNA ASP3-GFP e de fluorescência para GFP. A depleção para nitrogênio, em células portadoras do gene quimérico ASP3-GFP, fez aumentar a fluorescência, assim como a expressão de ASP3. Demonstramos que Asp3-GFPp pode ser utilizada para estudar a secreção de asparaginase II em células submetidas à privação de nitrogênio in vivo.

1. genomic integration
2. integração genômica
3. Saccharomyces cerevisiae
4. regulação por nitrogênio
5. asparaginase II
6. proteína de fluorescência verde
7. green fluorescent protein
8. nitrogen regulation