Asparaginase II-GFP fusion as a tool for studying the secretion of the enzyme under nitrogen starvation

Sotero-Martins, AdrianaBon, Elba Pinto da SilvaCarvajal, Elvira

A producão de asparaginase II de Saccharomyces cerevisiae é regulada por nitrogênio e pode ser utilizada como um sistema modelo para estudar outras proteínas secretadas, em leveduras. A proteína "green fluorescent protein" (GFP) de Aequorea victoria foi fusionada à porcão carboxi-terminal de Asp3p por integracão genômica da sequência de GFP ao locus ASP3. Determinaram-se os níveis de atividade de asparaginase II, mRNAASP3, mRNAASP3-GFP e de fluorescência para GFP. A deplecão para nitrogênio, em células portadoras do gene quimérico ASP3-GFP, fez aumentar a fluorescência, assim como a expressão de ASP3. Demonstramos que Asp3-GFPp pode ser utilizada para estudar a secrecão de asparaginase II em células submetidas à privacão de nitrogênio in vivo.