PRODUCTION OF PCB01, A PLASMID FOR DNA IMMUNIZATION AGAINST THE ADHESIN OF ESCHERICHIA COLI K88AB
Gil-Turnes, CarlosRochedo Conceição, FabrícioAntonio Dellagostin, Odir
Comunicam-se algumas características de cultivo e a produção de plasmídios por Escherichia coli JM109 transformada com pCB01, um plasmídio que codifica os genes da adesina fimbrial de E. coli K88ab e de resistência à ampicilina. A cepa foi cultivada em Infuso de Cérebro e Coração (BHI) e em caldo de Luria (LB), em Erlenmeyers agitados e em fermentador de bancada. A taxa de perda de plasmídios foi estimada pela diferença de contagens em meio com e sem ampicilina. Os rendimentos de plasmídios das culturas em Erlenmeyer variaram de 0,9 a 67 µg/ml de meio, entanto as cultivadas em fermentador alcançaram 62 µg/ml após 8 horas de cultivo. Células sem plasmídio superaram às transformadas de 5 a 1,2 vezes durante o cultivo. Os tempos de geração da população total e das células transformadas foram 33 e 61 minutos no fermentador, e 36 e 121 minutos em Erlenmeyers, respectivamente. O mesmo inoculo produziu 62 e 33 µg de plasmídio por ml de meio no fermentador e em Erlenmeyers, respectivamente. As concentrações de bactérias e o rendimento de plasmídios foram superiores em BHI que em LB. O rendimento de plasmídios obtidos do mesmo cultivo foram 1,7 vezes maiores quando a purificação foi feita pelo método de ultracentrifugação em gradientes de césio-brometo de etídio do que com colunas comerciais.
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