Use of endophytic diazotrophic bacteria as a vector to express the cry3A gene from Bacillus thuringiensis
Falcão Salles, Joanade Medeiros Gitahy, PatríciaSkøt, LeifIvo Baldani, José
Este estudo teve como objetivo avaliar o potencial de uso de bactérias diazotróficas endofíticas como vetores para a expressão de genes cry de Bacillus thuringiensis. As bactérias diazotróficas endofíticas Gluconacetobacter diazotrophicus estirpe BR11281 e Herbaspirillum seropedicae estirpe BR11335 foram usadas como modelo. O gene cry3A foi transferido através de um plasmídeo suicída por conjugação e os recombinantes foram selecionados pela sua capacidade de fixar nitrogênio em meio semi-sólido sem N. A presença do gene cry3A no genoma dos transconjugantes foi detectada através da técnica de "Southern blot" utilizando como sonda um fragmento de 1,0 kb, interno ao gene cry3A. A produção de delta-endotoxina pelos transconjugantes foi detectada por "Dot blot" em de H. seropedicae e por "Western blot" em G. diazotrophicus, usando-se o anticorpo específico para a toxina de B. thuringiensis. A avaliação da produção da delta-endotoxina mostrou que a expressão do gene cry3A em G. diazotrophicus é dependente do processo de fixação de nitrogênio por estar fusionado a um promotor nif nesta bactéria. No caso de H. seropedicae a expressão não foi influenciada pelo promotor de rizosfera (rhi) usado. Os resultados obtidos sugerem que estas bactérias diazotróficas endofíticas podem ser usadas como vetores para expressar genes com atividade entomopatogênica, visando o controle de pragas de cana-de-açúcar ou outras plantas de interesse econômico.
Texto completo