Histopathological events and detection of Metarhizium anisopliae using specific primers in infected immature stages of the fruit fly Anastrepha fraterculus (Wiedemann, 1830) (Diptera: Tephritidae)
Bechara, IJ.Destéfano, RHR.Bresil, C.Messias, CL.
O fungo Metarhizium anisopliae é usado em larga escala no Brasil como um agente de controle microbiológico contra a cigarrinha da cana-de-açúcar, Mahanarva posticata e M. fimbriolata (Hemiptera, Cercopidae). Aplicou-se a linhagem E9 de M. anisopliae em bioensaio no solo, nas dosagens de campo, para se determinar se este poderia causar infecção, doença e morte a estágios imaturos de Anastrepha fraterculus, a mosca sul-americana das frutas. Todos os eventos foram estudados histologicamente e ao nível molecular durante o ciclo da doença, usando-se uma nova técnica de coloração, o corante light Green, associado com a microscopia de luz, e a técnica do PCR, usando-se primers específicos desenvolvidos para M. anisopliae linhagens brasileiras, entre elas a E9. O ciclo infectivo, que se inicia pela adesão do conídio sobre a cutícula do hospedeiro, seguido da germinação, com ou sem a formação de apressório, penetração através da cutícula, colonização, com desenvolvimento da fase dimórfica, corpos hifais na hemocela com a morte do hospedeiro, dura 96 horas, nas condições do bioensaio, similar às condições de campo. Durante o ciclo da doença, propágulos do fungo entomopatogênico foram detectados pela identificação do DNA com primer específico ITSMet: 5'TCTGAATTTTTTATAAGTAT3' com o ITS4 (5'TCCTCCGCTTATTGATATGC3') como primer reverso. Esta metodologia simples permite o estudo in situ do processo infectivo, contribuindo com o entendimento da relação entre patógeneo hospedeiro e permitindo o monitoramento da eficácia e sobrevivência deste fungo entomopatogênico em aplicações em larga escala no campo. Esta também permite e facilita o monitoramento do impacto de M. anisopliae sobre insetos não alvos.
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