Clonagem de cDNA de um fator-1 de crescimento semelhante à insulina bovina de búfalos egípcios e expressão de sua proteína recombinante em Escherichia coli
Aboul-Soud, Mourad A. M
O fator de crescimento semelhante à insulina-1 (IGF-1) é considerado um agente terapêutico clinicamente significativo contra várias condições patológicas. Recentemente, a tecnologia de DNA recombinante (rDNA) permitiu a produção de muitos medicamentos de origem rDNA, incluindo o IGF-1. Garantir um suprimento prontamente disponível de IGF-1 é inestimável para pesquisas clínicas e domínios biotecnológicos. Neste trabalho, relata-se a clonagem de um cDNA de IGF-1 bovino de comprimento total e a expressão bem-sucedida de sua proteína IGF-1 recombinante cognata. O cDNA de cadeia simples foi preparado a partir de tecidos do fígado, por meio da transcrição reversa específica (RT) do mRNA de IGF-1. Posteriormente, um amplificador de PCR de ~ 543pb foi amplificado com sucesso. O vetor pTARGET recombinante contendo a inserção de IGF-1 foi clonado com sucesso em células competentes E. coli JM109. A análise por SDS-PAGE revelou que o IGF-1 recombinante foi expresso no tamanho esperado de 7,6kDa. O resultado fornece uma base robusta para a transferência do vetor pTARGETTMTM recombinante, abrigando a inserção de cDNA de IGF-1 em células de mamíferos. Verificou-se que a concentração inicial ideal de glicose é 10g/L, com a concentração de proteína correspondente de 6,2g/L. A proteína IGF-1 recombinante bruta de atividade biológica proliferativa foi verificada nas linhas celulares HeLa. É previsto que isso facilite a produção da proteína IGF-1 recombinante em larga escala, permitindo, assim, uma investigação completa dos seus efeitos clínicos e farmacêuticos.(AU)
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