Detecçäo de amostras brasileiras do herpesvirus bovino 1 (BHV-1) pela reaçäo em cadeia pela polimerase

Cândido, A. LMartins, A. SBarros, P. BResende, M

A técnica da reaçäo em cadeia pela DNA polimerase (PCR) foi usada para a amplificaçäo rápida de um fragmento de 456bp da regiäo única curta (Us) do genoma do BHV-1. Iniciadores de 18pb do gene da ORF1 foram usados para a amplificaçäo das amostras-padräo e brasileiras. Uma amplificaçäo clássica näo foi bem sucedida. A amplificaçäo foi obtida quando se escolheu uma regiäo com baixa concentraçäo de GC no DNA do BHV-1 e através da desnaturaçäo térmica (95§C para 5min) seguida de ciclos térmicos (94§C por 1min e 30seg; 52§C por 1min; 72§C por 1min e 30 seg; e ainda por 35 ciclos de 94§C por 1min; 52§C por 1min; 72§C por 1min e 30 seg; usando um tempo de extensäo final de 72§C por 5min). A clivagem com Pst I confirmou a especificidade do fragmento da ORF 1 do BHV-1. A amplificaçäo do fragmento em todas as amostras testadas sugere que a regiäo é fortemente conservada no genoma do BHV-1. Este PCR poderá detectar rapidamente amostras clínicas, sendo sensível e específico para diagnosticar infecçöes pelo BHV-1