Avaliação de duas técnicas de extração de DNA na detecção de Mycoplasma hyopneumoniaepor PCR em amostras de pulmões de suínos com e sem lesão de pneumonia
Nascimento, Elmiro Rosendo doCarrijo, Kênia de FátimaOgino, Liana LumiPereira, Virginia Léo de AlmeidaDias, Thomas SallesMachado, Leandro dos Santos
A Pneumonia Enzoótica Suína (PES) tem como agente etiológico primário a bactéria Mycoplasma hyopneumoniae. O diagnóstico da PES envolve manifestações clínicas na granja, lesões macroscópicas visualizadas no frigorífico e técnicas laboratoriais, tais como isolamento por cultura, histopatologia, imunoistoquímica, ELISA e outros testes sorológicos e PCR. O objetivo deste trabalho foi estabelecer a comparação entre resultados da PCR e achados macroscópicos típicos em pulmão com PES e avaliar a eficácia dos resultados da PCR com extração por fenol-clorofórmio e kit comercial, em fragmentos de pulmão de suínos. A eficácia da PCR foi avaliada pela comparação entre o método clássico de extração de DNA por fenol-clorofórmio e por Kit comercial. Fragmentos de pulmões de 18 suínos com lesões características de PES e 17 sem lesões foram submetidos a extração de DNA e posterior PCR. As lesões pulmonares com PES foram PCR positivas na PCR em 94.44%, contra 76.47% dos pulmões sem PES. A concordância por Kappa entre macroscopia e PCR foi 18%, não significativo, (p>0.05). Dos 35 fragmentos de pulmões processados por fenol-clorofórmio, 85.71% foram positivos por PCR, contra 28.57% pelo kit comercial. A concordância por Kappa entre os métodos de extração de DNA foi 57%, estatisticamente significativa (p<0,05), mas, o Odds ratio foi 15 (CI 4.52 to 49.68), o que significa dizer que a probabilidade de positividade por PCR pelo método de fenol-clorofórmio foi 15 vezes maior do que pelo kit comercial. Os resultados da macroscopia e PCR foram discordantes, sendo a extração por fenol-clorofórmio o melhor entre ambos os procedimentos usados.(AU)
Texto completo